तुलसी बाईस वर्ष की आयु में श्वेतांबर तेरापंथ संघ के नवम आचार्य बने और लगभग छह दशकों तक उसका नेतृत्व किया। 1949 में, भारत की स्वतंत्रता के कुछ ही समय बाद, उन्होंने अणुव्रत आंदोलन आरंभ किया: बेईमानी, व्यसन, हिंसा और अपव्यय के विरुद्ध छोटे, व्यावहारिक व्रत — जो धर्म या जाति का भेद किए बिना सबके लिए थे। इसके माध्यम से जैन नैतिकता देश भर के सार्वजनिक जीवन तक पहुँची।
उन्होंने लाडनूं में विद्या के केंद्र के रूप में जैन विश्व भारती की स्थापना की, साध्वियों की शिक्षा को प्रोत्साहित किया, और एक दुर्लभ कदम उठाते हुए अपने जीवनकाल में ही संघ का नेतृत्व अपने शिष्य आचार्य महाप्रज्ञ को सौंप दिया, जो विद्वान और प्रेक्षा ध्यान के आचार्य थे।

